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invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III SuperScript?,逆轉(zhuǎn)錄酶3

SuperScript III 反轉(zhuǎn)錄酶(RT) (SuperScript III Reverse Transcriptase (RT)) 是SuperScript II RT 的專有突變體，在50°C 具有活性，半衰期為220 分鐘，使用基因特異性引物(GSP) 提高特異性，在所有RT 中cDNA 產(chǎn)量zui高。如果要進(jìn)行特定基因的RT-PCR 或從總RNA 或poly (A)+ RNA 樣品生成cDNA，該產(chǎn)品十分理想。和SuperScript II 一樣，它可以從單鏈RNA、DNA 或RNA:DNA 雜合體合成互補(bǔ)DNA 鏈。通過引入點(diǎn)突變對SuperScript III RT 進(jìn)行遺傳改造，這些點(diǎn)突變可以增加半衰期、降低RNase 活性并增加熱穩(wěn)定性。進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾后： 

• 50°C 時半衰期為220 分鐘，獲得zui高的cDNA 產(chǎn)量（圖1）
• RNase H 活性降低，獲得更多全長cDNA
• 在50°C 有zui大活性，用GSP 增加特異性
• 能增加RT 單位而不抑制后續(xù)的PCR

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性能和質(zhì)量測試：SDS-PAGE 純度；脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶分析（圖2）及cDNA 產(chǎn)物的產(chǎn)量和長度。

單位定義：一個單位的SuperScript? III RT 是在37°C 的反應(yīng)體系中，使用poly(A)?oligo(dT)12-18 作為模板?引物，在10 分鐘內(nèi)將1 納摩爾脫氧核糖核苷酸摻入酸沉淀材料所需的酶量(3)。

單位反應(yīng)條件：50 mM Tris-HCl (pH 8.3)、40 mM KCl、6 mM MgCl 2、1 mM DTT。0.5 更看更多mM [ 3 H]dTTP、0.1 mM poly(A)、0.1 mM oligo(dT)12-18、0.1 mg/ml BSA 和酶，共50 μl，溫度37°C，時間10 分鐘。 

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